荧光定量pcr服务_荧光定量pcr的原理_生物科研实验外包

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实时定量PCR分析服务及荧光定量pcr原理

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实时荧光定量PCR技术(Real-Time Quantitative PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实时荧光定量PCR技术以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。

Q-PCR有三个特别重要的指标

扩增溶解曲线

扩增曲线是PCR过程中,以循环数为横坐标,以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映Q-PCR的动态进程。

溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的,如果产物是单一条带,溶解曲线就会出现单峰;如果有引物二聚体或其它非特异性扩增,就会出现至少两个峰。

荧光阈值

一般将PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值是PCR3-15个循环荧光信号标准差的10倍,荧光域值设定在PCR扩增的指数期(分为基线期、指数期以及平台期)。

Ct值

PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。

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